对动态范围进行量化需要一个运算公式,即动态范围值 = 20 log (well depth/read noise),其中Well depth代表是满井电子,是CCD饱和时能接受的电子信号总值,read noise是读出噪声(以电子数来表示),每个CCD在读数的过程中都会产生噪声,噪声越小,监测灵敏度越高。其中满井电子与CCD的bit值是相关的,通常下,bit值越高,满井电子的数值越大。
举例如下:
Well depth = 85,000 个电子, read noise = 12 个电子
Dynamic range = 20 log (85,000/12), or 77dB.
动态范围的值越高CCD性能越好.
(3)、量子效率
CCD的量子效率也称像素灵敏度,指在一定的曝光量下,像素势阱中所积累的电荷数与入射到像素表面上的光子数之比。不同结构的CCD其量子效率差异很大。比如100光子中积累到像素势阱中的电荷数是50个,则量子效率为50%(100 photons = 50 electrons means 50% efficiency)。值得注意的是CCD 的量子效率与入射光的波长有关。
(4)、信噪比
说到信噪比就不得不提到暗电流了,
暗电流是导致CCD噪音的很重要的因素。暗电流指在没有曝光的情况下,在一定的时间内,CCD传感器中像素产生的电荷。我们在做化学发光检测的时候,需要的曝光的时候比较长,这样导致CCD产生较多的暗电流,对图像的质量影响非常大。通常情况下通过降低CCD的温度来较为大限度的减少暗电流对成像的
影响。CCD产生的暗电流随着温度下降而减少,但是在-23℃下开始趋于平缓,由此可以得出温度并非需要无休止的降低的。所以在选择冷CCD时,温度在-25℃(温度,非室温以下)下一般就可以达到您的要求了。
有的CCD是在图像较为终生成后,通过软件去背景来扣除暗电流,对于信号远远强于背景的有一定效果,但是对于弱信号处理过程中会产生越来越多的错误。
(5)、光学镜头
光学镜头是机器视觉系统中*的部件,直接影响成像质量的优劣,影响算法的实现和效果。光学镜头规格繁多,有时不免头晕。光学镜头从焦距上可分为短焦镜头、中焦镜头,长焦镜头;从视场大小分有广角、标准,远摄镜头;结构上分有固定光圈定焦镜头,手动光圈定焦镜头,自动光圈定焦镜头,手动变焦镜头、自动变焦镜头,自动光圈电动变焦镜头,电动三可变(光圈、焦距、聚焦均可变)镜头等。
(6)滤光镜片
荧光:EB 、TLC plates、GFP plates、SYBR Green、SYBR Gold、SYBR Safe、SYPRO Red、SYPRO Orange、Texas Red、Rhodamine Red、Fluorescein、Deep Purple、Cy2、Cy3、Cy3.5、Cy5、荧光板等
(要根据具体的激发光源和滤镜来决定)
| 激发波长 | 吸收波长 | 染料 |
Blue | 475nm | 537nm | SYBR Green、SYBR Gold、SYBR Safe、SYPRO Orange、Cy2等 |
Green | 534nm | 606nm | SYPRO Red、Cy3等 |
Red | 632nm | 609nm | Texas Red、Rhodamine Red 、Cy5等 |
凝胶成像系统特点:
暗箱模具成型,小巧美观、抗干扰、密封性好!
专业化凝胶图像分析软件,全中文操作界面,自动识别8 bit、10bit、12 bit、16 bit图像,友好的人机界面,操作简便,功能强大,可对凝胶图像进行采集、编辑、分析及管理
日本原装高分辨率变焦光学镜头
安全实用的凝胶切割工作装置
全电脑控制所有操作过程,高度程序化(电脑控制暗箱/紫外及白光/光圈/变焦/焦距)
定时关机:用户可自行设定定时关闭紫外光源的时间
拍摄范围:较为大成像面积21cm×26cm
光源:多个辅助光源包括紫外透照,白光透照,紫外反射,白光反射等
主要功能:
1.凝胶图像剪辑处理,标记;
2.自动寻找凝胶条带;
3.与公用的标准条带或自选的标准条带比较;
4.条带(泳道)迁移路径的校正;
5.核酸、蛋白的处理,计算相应的分子量等数值;
6.详细的分析结果可输出成EXCEL格式,根据需要编辑。
适用范围:
从整体总的来说凝胶成像(系统)可应用于:蛋白质、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分离纯化结果作定性分析
(1)分子量定量
对于一般常用的DNA胶片,利用分子量定量功能,通过对胶上DNA Marker条带的已知分子量注释,自动生成拟合曲线,并以它衡量得到未知条带的分子量。通过这种方法所得到的结果较肉眼观察估计要准确很多。
(2)密度定量
一般常用的测定DNA(脱氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)浓度的方法是紫外吸收法,但它只能测定样品中的总核苷酸浓度,而不能区分各个长度片段的浓度。利用凝胶成像系统和软件,先将DNA胶片上某一已知其DNA含量的标准条带进行密度标定以后,可以方便的单击其他未知条带,根据与已知条带的密度做比较,可以得到未知DNA的含量。此方法也适用于对PA GE蛋白胶条带的浓度测定。
(3)密度扫描
在分子生物学和生物工程研究中,我们较为常用到的是对蛋白表达产物占整个菌体蛋白的百分含量的计算。传统的方法就是利用的密度扫描,但利用生物分析软件结合现在实验室常规配备的扫描仪或者直接用白光照射的凝胶成像就能完成此项工作。
(4)PCR定量
PCR定量主要是指,如果PCR实验扩增出来的条带不是一条,那么可以利用软件计算出各个条带占总体条带的相对百分数。就此功能而言,与密度扫描类似,但实际在原理上并不相同。PCR定量是对选定的几条带进行相对密度定量并计算其占总和的百分数,密度扫描时并对选择区域生成纵向扫描曲线图并积分。
凝胶成像的分类:
(1)普通凝胶成像分析系统:可以对蛋白电泳凝胶,DNA凝胶样品进行图象采集并进行定性和定量分析,样品包括:EB、SYBR Green、SYBR Gold、Texas Red、GelStar、Fluoroscecin、Radiant Red等染色的核酸监测;以及Coomassie Blue、SYPRO Orange、各种染色的蛋白质凝胶如考染等。(或UV,EB和有色及可见样品成像);
(2)化学发光成像分析系统:成像范围涵盖UV,EB,化学发光、紫外-荧光、有色及可见样品成像;
(3)多色荧光成像分析系统:成像范围涵盖UV,EB,化学发光、多色荧光荧光、有色及可见样品成像;
(4)多功能活体成像分析系统:UV,EB,化学发光、多色荧光荧光、有色及可见样品成像和离体组织和小型动物,及大型型动物。
较为后是品牌推荐:
进口品牌美国的市场上见的是相对比较多的有:UVP、伯乐、alpha、SIM、KODAK、GE、Wealtec等;德国品牌主要有:Royal、Raytest等;英国品牌:UVI、Fedbio等;以色列DNR;荷兰Isogen等等。目前这些国内进口品牌和国产品牌的差不多,但是价格肯定是高于国产品牌。
中国本土企业也掌握了凝胶成像核心技术,性能方面不比进口差,价格又比进口的低,本土的品牌大致上可见:北京六一、君意东方、上海领成、上海培清、上海山富、上海复日、上海嘉鹏、上海勤翔、江苏捷达等品牌。