abi7500荧光定量pcr使用方法
Q:7500快速定量PCR仪可以使用0.2ml PCR反应管或者96孔板吗?
A:不可以，7500 快速定量PCR仪只支持0.1ml PCR反应管或者96孔板
Q:如何监控反应体系是否有蒸发?
A:查看Rox信号是否在整个PCR过程中保持一致。在多组分图谱界面，选择单孔，如果Rox信号逐渐增高，代表样品孔中有蒸发。如下图所示:
Q:内参基因与目标基因是否需要在相同的反应板上运行相对定量?
A:是，内参基因必须和目标基因在相同的反应板上。软件可以根据在相同反应板上的内参基因和目标基因自动进行相对定量计算，并计算估值区间。
Q:定量PCR系统支持的荧光染料有哪些?
A:下面是实时定量PCR仪器能够检测染料的表:
DYE | 7300 | 7500 | 7900 |
Cy3™ |
| X |
|
Cy5™ |
| X |
|
FAM™ | X | X | X |
JOE™ | X | X | X |
NED™ | X | X | X |
ROX™ | X | X | X |
SYBR® Green I | X | X | X |
TAMRA™ | X | X | X |
Texas Red® |
| X |
|
TET™ |
|
| X |
VIC® | X | X | X |
Q:用户是否可以添加自定义染料?
A:可以，可以添加自定义染料，但染料的激发和发射波长必须与仪器的滤光片设置兼容。
Q:常用荧光染料的发射波长为多少?
A:
染料名称 | 发射波长(nm) |
FAM™ | ~520 |
SYBR® Green I | ~520 |
TET™ | ~540 |
JOE™ | ~550 |
VIC® | ~550 |
NED™ | ~580 |
CY3™ | ~580 |
TAMRA™ | ~580 |
ROX™ | ~610 |
Texas Red® | ~610 |
CY5™ | ~670 |
Q:ABI各种型号的定量PCR仪有什么特点?
A:
◆ 7300、7500、7500 快速系统是用卤钨灯作为激发光源，并利用滤光片检测激发荧光
◆ 7300是一个激发光和四色滤光片
◆ 7500和7500快速有五个激发光和五个滤光片，所以可以检测远红外。
◆ 7900HT系统是用氩离子激光作为激发光源，可以扫描500nm -650nm所有波长的荧光
◆ 7900HT系统可以提供更高通量，如 384孔板和低密度芯片升级，以及自动手臂来装载反应板设备
Q:BHQ作为探针的淬灭基团，在ABI定量PCR系统如何设定?
A:淬灭基团设为none。
Q:7300/7500/7900HT定量PCR系统软件生成的文件有哪些?
A:针对7300 v1.4及以下版本软件，7500 v1.4 及以下版本软件，7900HT软件生成的文件，包含扩增曲线的为数据文件，以 sds为文件后缀。相对定量分析产生以sdm为后缀文件，设置模板以 sdt为后缀。
针对7500 v2.0版本软件，包含扩增曲线的为数据文件，以 eds为文件后缀。相对定量分析产生以edm为后缀文件，设置模板以 edt为后缀。
