PCR(Polymerase Chain Reaction),是指在DNA聚合酶催化下,以母链DNA为模板,以特定引物为延伸起点。通过变性、退火、延伸等步骤,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。 经典的PCR扩增反应分为三步:
1、高温变性:模板DNA经加热至95℃左右一定时间后,使模板DNA双链解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;
2、低温退火:模板DNA与引物的复性,模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
3、适温延伸:DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶的作用下,以核苷酸为反应原料,靶序列为模板,按碱基互补配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。
影响扩增的因素:
1、由于各种原因,造成的PCR扩增体系中出现了非目的检测样本本身的模板,使得PCR结果出现假阳性
2、操作错误或者误差造成的模板间交叉污染
3、PCR试剂的污染
4、PCR实验器材的污染
5、PCR扩增产物的气溶胶污染
防止污染的首要原则是要设置NTC(No Template Contro|)对照,一个不含有模板DNA但含有PCR体系中所有其他成分的对照。如果不能在污染的第一时间发现,会导致后续一系列的数据无法使用。准备PCR体系的移液器要,千万不能用吸取过PCR产物的移液器去准备PCR体系。
技术参数及配置要求 | 1 工作环境 1.1 工作温度 15-31℃ 1.2 工作和存储湿度 20-80% 1.3 工作电源 100–240 VAC (±10%), 50–60HZ. 2 用途 用于体外核酸片段扩增,具有温度梯度功能。 3 性能与技术要求(*为必须满足的指标) 3.1 主要性能 3.1.1 有5.7"高分辨率超大彩色液晶显示屏,实验过程中实时显示温控及运行状态 3.1.2 用户可设置休眠模式使其更节电 3.2 主要技术指标(*为必须满足的指标) * 3.2.1 标准反应模板:96-well 0.2 ml 反应板或96个0.2ml PCR管 *3.2.2 最大升降温速率:4℃/秒 * 3.2.3 温度梯度:同时运行8个不同温度;温度梯度范围:30 - 100℃;温差范围:1 - 25℃ *3.2.4 温度范围:4-100℃ *3.2.5 5.7"高分辨率超大彩色液晶显示屏,文字及温度曲线全信息动态显示,保证实时控制实验过程 3.2.6 可存储500个用户程序 3.2.7 接口:1个USB |