酶标仪即酶联免疫检测仪是酶联免疫吸附试验的仪器又称微孔板检测器。可简单地分为半自动和全自动2大类,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一个比色计,即用比色法来进行分析。 测定一般要求测试液的较为终体积在250μL以下,用一般光电比色计无法完成测试,因此对酶标仪中的光电比色计有特殊要求。
酶标仪主要应用于酶联免疫吸附检测反应中检测吸光度值,其用途主要应用于ELISA试剂的测定,广泛用于各种实验室,包括临床实验室。
酶标仪测定原理是:在特定波长下,检测被测物的吸光值。
检测单位:
光通过被检测物,前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量,特定波长下,同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。
检测单位用OD值表示, OD是optical delnsity(光密度)的缩写,表示被检测物吸收掉的光密度, OD=1og(1/trans),其中trans为检测物的透光值。根据Bouger-amberT-beer法则,OD值与光强度成下述关系:
E=OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度, Ι0 为在检测物之前的光强度,Ι为从被检测物出来的光强度。
OD值由下述公式计算:
E=OD=C×D×E
C为检测物的浓度
D为检测物的厚度
E为摩尔因子
在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长,在此波长下,此物质能够吸收较为多的光能量。如果选择其它的波长段,就会造成检测结果的不准确。因此,在测定检测物时,我们选择特定的波长进行检测,称为测量波长。
但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收,为了消除这种非特异性吸收,我们再选取一个参照波长,以消除这个不准确性。在参照波长下,检测物光的吸收较为小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。
一般使用到酶标仪的主要是在食品安全药物残留快速检测中,例如配合北京望尔生物技术有限公司的克伦特罗、氯霉素、呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、磺胺类、氟喹诺酮类、链霉素、青霉素等残留快速检测ELISA试剂盒使用时,一般使用酶标仪来进行定量检测。
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